Di tahun 2003, Yoo Ah In memulai debutnya sebagai seorang idol dan turut berpartisipasi dalam serial remaja bertajuk Sharp. Memerankan karakter mahasiswa teladan, Yoo Ah In mencuri banyak perhatian pemirsa hingga namanya meroket.
Pada tahun selanjutnya, ia kembali ditunjuk untuk mengambil peran di drama April Kiss, dan wajahnya mulai wara-wiri sebagai bintang iklan diantaranya menjadi model segaram sekolah hingga pakaian remaja.
Jatuh cinta pada dunia seni peran, Yoo Ah In akhirnya memutuskan untuk fokus berakting. Di tahun 2010, ia berperan di drama Sungkyunkwan Scandal yang semakin membuat namanya populer.
Sepanjang kariernya, Yoo Ah In sudah turut berpartisipasi di deretan judul drama dengan berbagai genre seperti Fashion King (2012), Jang Ok Jung (2013), Secret Affair (2014), The Roots of Throne (2015), Chicago Typewriter (2017), hingga Hellbound (2021).
Selain drama, Yoo Ah In juga menunjukan pesona aktingnya lewat film Punch (2011), Veteran (2015), Burning (2018), #Alive (2020), Voice of Silence (2020), dan masih banyak lagi.
Yoo Ah In juga tercatat mendapat 2 penghargaan bergengsi di BaekSang Arts Awards sebagai Aktor Terbaik untuk perannya di drama The Roots of Throne dan film Voice of Silence.